尊龙凯时人前列腺癌细胞VCAP培养说明书

一、细胞培养条件

细胞培养应在严格控制的环境下进行，以确保细胞健康生长。

二、细胞收到后的处理步骤

在收到细胞后，首先使用75%酒精对整个细胞瓶进行消毒，然后将其放置于超净台内进行无菌操作。细胞瓶应置于37℃、5% CO2培养箱中静置3-4小时，以期稳定细胞状态。接着，需要显微镜下观察细胞生长情况，并拍摄不同倍率的照片（建议40x、100x、200x各一张），前三天的照片是重要的售后依据，如未提供照片则默认收到状态良好。在传代培养时，建议一瓶使用原有培养基，另一瓶使用自配的培养基，以便进行对比培养。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

当细胞密度未超过80%时，收集瓶中的完全培养液至离心管中，保留5ml培养基，并放入37℃、5% CO2培养箱；如细胞密度超过80%，则进行传代。具体步骤如下：

1. 弃去上清，用无钙镁PBS洗涤细胞1-2次。
2. 添加约1-2ml的0.25%胰蛋白酶消化液，放入37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞消化情况，当细胞大部分变圆并脱落时，快速返回操作台，轻轻敲打培养瓶并加入5ml以上的完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞直至其完全脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟，弃去上清，补加1-2ml完全培养基使其重悬。
4. 按1:2的比例将细胞悬液进行分瓶传代（两个T25瓶），并补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2培养箱中培养。

b. 细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶的80%时，弃去培养液，使用PBS清洗一次。
2. 添加约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液，与培养瓶翻转观察，待细胞回缩变圆后迅速加入5ml完全培养基终止消化，再轻轻吹打使细胞脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟。
3. 弃去上清后，加入1ml的尊龙凯时无血清冻存液（货号：C7001）混合均匀后转移至冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱，若后期需要转入液氮罐中，则需在-80℃冰箱中储存24小时以上后再进行转移。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管（注意佩戴防护面具），迅速放入37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭管外壁。
2. 将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀再用5ml完全培养基重悬，并接种至T25培养瓶，放在37℃、5% CO2培养箱中。
4. 次日更换为新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

有些细胞可能在运输过程中发生脱落，这是正常现象。如果脱落较多，可将培养瓶内所有培养液收集至离心管中，1000 RPM离心5分钟，将上清液用于过渡培养。沉淀后加入1-2ml胰蛋白酶进行重悬，并消化1-2分钟后加5ml完全培养基终止反应，随后再离心，弃去上清，重悬后按1:2比例传代。

五、售后条款

1）细胞出现问题可重发的情况

如细胞在运输过程中出现丢失、瓶身破损、培养液漏液等问题，可进行重发。细胞污染问题需在收到产品48小时内提供真实实验结果以便检验。若常温发货后，细胞静置24小时未存活，同样可重发。关于细胞活性问题，需在收到产品7天内提供相关证明，尊龙凯时将根据情况进行重发。

2）细胞出现问题不予重发的情况

如细胞受到客户自身操作不当造成的污染，或因不推荐的细胞培养体系导致的细胞状态失常，则不予重发。若收到后未及时告知及详细说明情况，尊龙凯时也将不予重发。