尊龙凯时提供的人恶性黑色素瘤细胞WM115培养说明书，旨在为研究人员提供详细的细胞培养指导，以确保实验的成功和细胞的健康生长。

一、细胞培养条件

细胞名称：人恶性黑色素瘤细胞WM115
生长特性：贴壁
冻存条件：无血清冻存液
培养体系：MEM+10%FBS+1%P/S
传代方法：第一次建议1:2传代
传代情况：每两天更换培养基
备注：建议用无菌离心管收集培养基用于对比培养，如效果不理想，建议直接购买尊龙凯时的完全培养基。

二、细胞收到后的处理

收货后，将培养至良好状态的细胞灌满完全培养液，并密封瓶口，这是运输细胞的最佳方法。收到细胞时，需用75%酒精喷洒整个胞瓶进行消毒，随后在超净工作台内进行无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5%CO2的培养箱中静置3-4小时，以便细胞恢复稳定状态。利用显微镜观察细胞生长情况，并拍摄不同倍数的照片保存，前三天的照片为重要依据，未提供照片视为状态良好。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

若细胞聚集度未超过80%，应将培养瓶中的完全培养液收集至离心管中，保留5ml培养基于37℃、5%CO2孵箱中培养；若细胞密度超80%，可进行传代培养，具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，利用不含钙、镁的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加入0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml，置于37℃孵箱中消化1-2分钟，观察细胞变化。
3. 当细胞变圆并脱落后，迅速添加5ml以上的完全培养基以终止消化。
4. 轻轻吹打细胞以确保完全脱落，吸出悬液并转移至15ml离心管中，在1000RPM条件下离心5分钟，去除上清后补加1-2ml完全培养基重悬。
5. 按1:2比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，置于37℃、5%CO2的培养箱中。

b. 细胞冻存

当细胞覆盖培养瓶80%面积时，弃去培养液并用PBS清洗。添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，待细胞回缩后补加5ml完全培养液，以终止消化。轻轻吹打后，将悬液转移至离心管中，1000RPM离心5分钟，去除上清后，将1ml尊龙凯时无血清冻存液混匀后装入冻存管中。将冻存的细胞放入-80℃冰箱中存放，如后期转移至液氮罐中，则需在-80℃冰箱中存放24小时以上。

c. 细胞复苏

从液氮中取出冻存管，迅速置于37℃水浴中解冻，直至无结晶；随后用75%酒精擦拭冻存管外壁。将细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟，去除上清后重悬于5ml完全培养基中，接种于T25培养瓶中，并放入37℃、5%CO2的细胞培养箱中继续培养。第二天更换为新鲜的完全培养基进行继续培养。

四、注意事项

细胞在运输过程中可能出现脱落现象，这是正常的。如脱落较多，则需将所有培养液收集至离心管，进行离心处理以作对比培养。操作与处理应谨慎，确保细胞的存活及生长。

五、售后条款

以下情况可申请重发细胞：1.运输过程中细胞丢失、瓶身破损、培养液泄漏等；2.收到产品48小时内出现污染，需提供真实实验结果；3.常温发货或干冰发货的细胞复苏后存活率低，需提供状态照片；4.细胞活性问题需在7天内反馈并提供染色结果；5.首次收到的3天内需拍照备查。
不予重发的情况包括：1.客户造成的污染；2.不当操作导致细胞状态不良；3.未使用推荐的培养体系；4.未提供前三天的照片等。