背景介绍

裸露的RNA因其带负电荷特性，自身为亲水性大分子，因此较难穿透细胞膜，且易被广泛存在的RNA酶降解。这就使得RNA在进入细胞时需要一个保护性的外壳。细胞膜主要由脂质组成，利用脂质囊泡包裹RNA能够有效穿过细胞膜并将其释入细胞质中。这些囊泡通常需要带有正电荷，以便与带负电的RNA结合。然而，由于由永jiu性阳离子脂质构成的囊泡可能因电荷作用与带负电的细胞膜相互作用而导致细胞毒性，因此脂质结构应在内体酸性环境中能响应并重新获得正电荷。

脂质纳米粒结构

脂质纳米粒（LNP）的基本构成包括四种关键成分：可离子化阳离子脂质、磷脂（两性离子脂质）、胆固醇和PEG化脂质。这些成分共同作用于提供RNA的保护及传递能力，且在激活免疫反应上也起到了关键的作用。

脂质纳米粒递送机制

作为mRNA传递系统，LNP的工作机制要经过多个步骤，以确保mRNA能安全有效地递送至目标细胞并充分表达蛋白。可离子化的阳离子脂质在这个过程中扮演了至关重要的角色。在自组装形成LNP时，它可以中和带负电荷的RNA，且在中性pH条件下，保持不带电以降低毒性，待细胞吸收后再重新带正电，促进内体的逃逸。胆固醇与PEG脂质的变体亦有助于调节LNP的物理特性及最终效果。

LNP转染实验步骤

以下是6孔板单孔的转染步骤参考条件。其他培养形式的详细信息请参见表1。

1. mRNA预混液制备：将25μg mRNA（浓度为1μg/μL）与60μL Buffer 混合。

2. mRNA-easyLNP复合物制备：将625μL mRNA预混液与625μL easyLNP纳米悬液混合，涡旋2-3秒以确保均匀混合。

3. 加入细胞：将125μL mRNA-easyLNP复合物加入细胞中，轻轻晃动以实现均匀分散。

4. 分析时间：在细胞培养24-48小时后进行分析。

表1: mRNA转染指南

不同培养容器的转染步骤：

• 96孔板：40ng/μL mRNA预混液制备 Buffer(原液浓度1μg/μL为例) 24μL; 1μg mRNA
• 24孔板：12μL; 5μg mRNA
• 6孔板：60μL; 25μg mRNA

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